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BCA蛋白浓度测定试剂盒500微孔(50T)

发布日期: 2019-08-15
浏览人气: 970

 

 

BCA蛋白浓度测定试剂盒500微孔(50T)

品牌:Solarbio | 货号:PC0020

 

英文名称

BCA Protein Assay Kit

储存条件

BSA附件-20℃,其它试剂RT,有效期1年

单位

产品内容:

BCA蛋白浓度测定试剂盒组成

产品简介:

碱性条件下,蛋白将Cu2+还原为Cu+, Cu+与BCA试剂形成紫蓝色的络合物,测定其在562nm处的吸收值,并与标准曲线对比,即可计算待测蛋白的浓度。常用浓度的去垢剂SDS,Triton X-100,Tween不影响检测结果,但受螯合剂(EDTA, EGTA)、还原剂(DTT,巯基乙醇)和脂类的影响。实验中,若发现样品稀释液或裂解液本身背景值较高,可试用Bradford蛋白浓度测定试剂盒。

 

操作说明:

一. 微孔酶标仪法

1. 配制工作液:根据标准品和样品数量,按50体积BCA试剂加1体积Cu试剂(50:1)配制成BCA工作液,充分混匀(混合时可能会有浑浊,但混匀后就会消失)。BCA工作液室温24小时内稳定。

2. 稀释标准品:取10μL BSA标准品用PBS稀释100μL(样品一般可用PBS稀释),使终浓度为0.5mg/mL。将标准品按0, 2, 4, 6, 8, 12, 16, 20μL加到96孔板的蛋白标准品孔中,加PBS补足20μL。

3. 将样品作适当稀释(一般要多做几个梯度,如作2倍、4倍、8倍稀释),加20μL到96孔板的样品孔中。由于移液器在取小量样品时误差偏大,标准线前面的点可能不很准确,所以尽可能的让样品点落在标准线1/2后。

4. 各孔加入200μL BCA工作液,37℃放置15-30分钟。用酶标仪测定A562nm,根据标准曲线计算出蛋白浓度。使用温箱孵育时,应注意防止因水分蒸发影响检测结果。

二. 分光光度计法 如没有酶标仪,可用分光光度计在离心管中混匀后加入比色皿中比色。 步骤如下:

1. 配制工作液: 根据标准品和样品数量,按50体积BCA试剂加1体积Cu试剂(50:1)配制成BCA工作液,充分混匀(混合时可能会有浑浊,但混匀后就会消失)。BCA工作液室温24小时内稳定。

2. 稀释标准品:取100μL BSA标准品用PBS稀释1mL(样品一般可用PBS稀释),使终浓度为0.5mg/mL。

3. 取八支(或者更多)5mL离心管,标上号,按下表加入试剂。

BCA蛋白浓度测定试剂盒实验数据

4.37℃放置15-30分钟。用分光光度计测562nm处吸光值,根据标准曲线计算出蛋白浓度。 

注意事项:

1. 长期不用时,Cu试剂与PBS稀释液可置于2-8℃保存,如发现细菌污染则应丢弃。BCA试剂在低温条件下出现结晶沉淀时,可37℃温育使其完全溶解, 不影响使用。

2. 样品中若含有较多干扰物质时,请采用Bradford蛋白浓度测定试剂盒。

3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

 

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